А.И.Крашенюк, Академия Гирудотерапии, Санкт-Петербург.
Е.П.Маркова, Диагностический Лабораторный Центр, Академия Гирудотерапии, Санкт-Петербург.
Теоретическая и практическая значимость исследования. Впервые в мире после интравагинальных постановок клинический диагноз заболевания у пациенток, проходивших лечение методом гирудотерапии, подтверждён морфологически при проведении цитологического исследования биологического материала, отделяемого в процессе сеансов лечения медицинскими пиявками.[1]
Морфологические исследования в клинике приобретают особую значимость, если анализируются в сопоставлении со всеми данными клиники во всём их объёме.
Вопрос об эффективности цитологической диагностики и ценности этого метода в практической деятельности не вызывает сомнений, достоверность метода составляет до 96%. [9]
Впервые, в сентябре 2012 года, были проведены морфологические исследования биологического материала, полученного при постановке медицинских пиявок на слизистые оболочки женщины (интравагинальная постановка) и был использован цитологический метод клинической лабораторной диагностики для изучения и анализа полученного отделяемого в процессе гирудотерапии. Подробно описано прикладное применение цитологического исследования в гирудотерапии — одного из современных лабораторных методов морфологического анализа, применяемого для диагностики патологии в лечебной практике. [2]
Ключевые слова:
«Феномен гирудобиопсии» — отторжение патологически изменённых клеток в процессе сеансов гирудотерапии — уникальное явление, описанное впервые. Даёт дополнительные возможности для оценки состояния здоровья человека при проведении лечебных манипуляций и является одновременно лечебной и диагностической процедурой;
гирудобиопсия – получение биологического материала в процессе проведения сеансов гирудотерапии, для цитологического исследования, с лечебной и диагностической целью;
цитология (от греческого kytos – клетка, logos – учение) – наука о развитии, строении и жизнедеятельности клеток растительных и животных организмов;
Цитологическое исследование – один из методов клинической лабораторной диагностики, применяемый для изучения морфологических характеристик клеток с помощью микроскопа, после специальной обработки и окраски цитологических препаратов. Анализ клеточного материала необходим для лечения и диагностики, и имеет огромное значение для выбора тактики лечения заболеваний.
Историческая справка: ещё в далёком 1665 году был написан трактат «О приставлении пиявок к внутренним частям матки» и с этого момента в XVII веке получает развитие применения медицинских пиявок в лечении гинекологических заболеваний.
На Х Международном противораковом конгрессе в Токио в 1966 г. цитологический метод был одобрен и рекомендован для широкого применения в онкологической практике. [3,4,5]
Опыт цитологических исследований при диагностике злокачественных опухолей различных локализаций обобщён в трудах А.И. Зубакиной, Н.Н. Шиллер-Волковой с соавторами, А.С.Петровой, К.А.Агамовой, И.П.Шабаловой и другими. [6,7,8]
Впервые организация и этапы морфологического исследования проведено в Академии Гирудотерапии на курсе обучения курсантов авторской методике лечения медицинскими пиявками профессора Крашенюка А.И. в 2012 году и продолжается в настоящее время.
Постановка медицинских пиявок на слизистые проводится в процедурном кабинете медицинского центра, клиники Академии Гирудотерпии.
Цитологические исследования проводятся в Лабораторном Диагностическом Центре в Санкт-Петербурге.
При ранней диагностике доброкачественной патологии шейки матки и цервикального канала имеет место благоприятный прогноз течения заболевания и полное излечение. При запущенных и вялотекущих хронических воспалительных и доброкачественных процессах возможно развитие онкологической патологии, предраковые состояния.
Основываясь на комплексе цитологических критериев злокачественности с достаточной степенью достоверности (до 96% по статистике) можно установить принадлежность клетки к злокачественному новообразованию. [9,10]
Применение известных цитологических классификаций для оценки клеточных изменений, полученного биологического материала у пациентов клиники Академии Гирудотерпии, даёт возможность использования «феномена гирудобиопсия» для морфологического подтверждения диагноза заболевания.
Физиологические и технические особенности интравагинальных приставок медицинских пиявок на сеансах гирудотерапии. Приставка медицинских пиявок интравагинально — как лечебная манипуляция применяется специально обученными сотрудниками с медицинским образованием. Проведение процедуры постановки медицинских пиявок в полость влагалища после вагинальной установки зеркала Куско.
Сеанс продолжается 30-50 минут, после самостоятельного отделения пиявок происходит выделение содержимого из влагалища, из которого готовим мазки для цитологического исследования под микроскопом.
При других локализациях приставка медицинских пиявок проводиться локально в зоне патологического очага.
Схема расположения цилиндрического эпителия и зоны трансформации на шейке матки из атласа [6]; а – до полового созревания (зона трансформации расположена в цервикальном канале), б, в – во время детородного периода (перемещается на влагалищную часть шейки матки), – замещение цилиндрического эпителия метаплазированным эпителием. [11]
Актуальность исследования. Научный интерес к терапевтическим эффектам гирудотерапии способствует многостороннему изучению механизмов взаимодействия организма человека и медицинской пиявки; появляются научные работы в области пограничных с медициной наук — биохимии, биофизики и других направлений.
Цитологический лабораторный метод основан на изучении морфологии клеток и даёт возможность оценить изменения патологического процесса на клеточном и тканевом уровне и из области научных исследований переходит в практическую клиническую лабораторную диагностику. [12,13,14]
Одним из ведущих методов клинической лабораторной диагностики является микроскопическое (цитологическое) исследование, с помощью которого возможно проводить морфологический анализ клеточного материала, полученного при различных методах: при пункции, исследовании секретов и экскретов, инструментальных исследованиях, оперативных вмешательствах и т.д.
Предметом нашего исследования являются цитологические препараты, приготовленные из биологического материала, полученного в результате постановки медицинских пиявок на слизистые человека: перианальной зоны, полости рта, интравагинальной области.
Биологический материал, полученный в процессе сеансов гирудотерапии, наносится на предметное стекло и распределяется равномерно тонким слоем.
Приготовленный препарат подсушивается естественным путём на воздухе и доставляется в лабораторию.
После специальной обработки биологического материала проводится микроскопическое исследование и анализ клеточных элементов с целью изучения морфологических характеристик отделяемого и определение патологического процесса.
Специфические изменения клеточных характеристик определяют характер патологии и постановку морфологического диагноза с учетом ранее разработанных и применяемых международных цитологических классификаций.
При описании результатов цитологического исследования используются диагностические, а не количественные термины. В отличие от классических лабораторных методов, которые являются количественными, клиническая цитология носит описательный характер и это сближает цитологию с другим морфологическим методом – гистологией. [12,13,15]
Биологический материал со слизистых оболочек, полученный в процессе гирудотерапии, пригоден для исследования с помощью иммерсионной системы светового оптического микроскопа и позволяет проводить диагностику предопухолевой и опухолевой патологии, и осуществлять динамический контроль в процессе лечения.
Клеточный материал получают без применения медицинских инструментов, естественным путём, патологически изменённые клетки элиминируются из организма человека.
После специальной лабораторной обработки и окраски красящими веществами цитологические препараты изучаются с помощью микроскопа на разных увеличениях с воздушной и масляной иммерсией.
Клетки имеют сохранное строение внутриклеточных структур, что позволяет видеть морфологические особенности строения в изменённых клетках, характеризующие разные заболевания.
Для проведения адекватного исследования важен правильный отбор материала и квалифицированные кадры, способные проводить диагностику полученного клеточного материала. [16,17]
В процессе лечения проведение постановки медицинских пиявок сопровождается получением клеточного субстрата — биологического отделяемого в виде объёмных выделений разного размера и разного количества жидкого кровянистого содержимого.
Объёмные образования мягкой эластичной консистенции, легко разрушаются пинцетом, выделяются имеющиеся беловатые, слизистые и тёмно-красные прожилки, аккуратно равномерно тонким слоем распределяются по предварительно обезжиренному (96% этиловым спиртом) предметному стеклу готовим мазки для цитологического исследования.
Приготовленные цитологические мазки, после высыхания на воздухе фиксируются, окрашиваются и исследуются под оптическим световым микроскопом.
Окрашенные препараты изучали под микроскопом при увеличении с объективами на x10, х40, x100 с масляной иммерсией и оценивали изменения морфологии полученных клеток. Хорошие результаты окраски получены при использовании модифицированной методики по Романовскому-Гимзы. [18]
Для окраски мазков, полученных для цитологического исследования, используют методики, основанные на различной реакции клеточных структур на кислые и основные красители.
Цитологические препараты имеют характеристики клеток адекватные для микроскопического исследования и изучения морфологических признаков, с целью оценки качества полученного биологического материала и постановки диагноза патологического процесса.
Для исследования приготовлены цитологические препараты и выполнено микроскопическое исследование отделяемых тканей влагалища, слизистой полости рта, отделяемое со слизистой прямой кишки и сделаны микрофотографии цитологических препаратов (приведены далее в тексте, все микрофотографии выполнены автором Е.П. Марковой).
Фотографии 1, 2 и 3 процесса приготовления цитологических препаратов при получении вагинального содержимого одной из пациенток. (Фото авторов: А.И.Крашенюк, Е.П.Маркова).
Фото: 1,2,3.
Впервые в мире проведены лабораторные анализы и описаны результаты микроскопического исследования патологически изменённых клеток после сеанса гирудотерапии:
1) из влагалища и шейки матки при вагинальной постановке медицинских пиявок женщинам разного возраста;
2) со слизистой полости рта;
3) со слизистой прямой кишки.
Проведение цитологического исследования и анализ клеточного материала проводится узкими специалистами: врачами-цитологами.
Примеры проведения цитологических анализов и результаты исследований из практики пациентов Академии Гирудотерапии.
Гинекологическая патология.
Пример 1. Из истории амбулаторной карты наблюдения Академии Гирудотерапии пациентки С., 1974 г.р. (38 лет).
Клинический диагноз: Бесплодие I.
Заключение: Цитограмма лейкоплакии. Косвенные признаки наличия вирусного поражения.
При проведении ПЦР обследования выделены вирус Эпштейн-Барра.
Микрофото (а, б, в) нескольких полей зрения одного из цитологических препаратов пациентки С., 1974 г.р., (38 лет).
Микрофото: a, б, в.
Пример 2. Из истории амбулаторной карты наблюдения Академии Гирудотерапии пациентки П. 1981 г.р. (31 год).
Клинический диагноз: Бесплодие. Носитель вируса HSV(2 типа).
Заключение: Цитограмма возможна при эрозии шейки матки. Признаки кандидоза. Косвенные признаки наличия вирусного поражения. Носитель вируса HSV(2 типа).
На наличие вирусов пациентка обследована до обращения по поводу лечения в Академии.
Микрофото (а, б, в) нескольких полей зрения одного из цитологических препаратов пациентки П., 1981 г.р., (31 г.)
Микрофото: a, б, в.
Пример 3. Из истории амбулаторной карты наблюдения Академии Гирудотерапии пациентки Т, 1979 г.р. (34 года).
Клинический диагноз: Бесплодие.I. Хронический эндометрит. Хронический сальпингит. Трубная непроходимость справа. В анамнезе хламидиоз. В процессе лечения гирудотерапии:
Заключение: Признаки воспаления умеренно выражены. Лейкоплакия. Косвенные признаки наличия вирусного поражения. Лёгкая дисплазия. (по Классификации ВОЗ). CIN 1 (Cervical Intraepithelial Neoplasia – CIN) по Международной классификации.
Микрофото (а, б, в) нескольких полей зрения одного из цитологических препаратов пациентки Т., 1979 г.р., (34г.).
Микрофото: а, б, в.
Другие локализации.
Пример 4. Из истории амбулаторной карты наблюдения Академии Гирудотерапии пациентки М. 1963 г.р.
Обращение по поводу Ишемической болезни сердца. Длительное течение в анамнезе с 30 лет, лечение амбулаторно. В детстве герпетические высыпания на губах. Гранулёма верхней челюсти слева (область 3-4 зубов). На вирусы не обследована. В процессе гирудотерапии 8 месяцев по поводу ИБС.
В процессе лечения методом гирудотерапии жалобы на боли в области верхней челюсти слева.
Постановка медицинских пиявок на слизистую верхней челюсти слева, в области 3-4 зуба.
Заключение: Косвенные признаки наличия вирусного поражения, Лейкоплакия. Единичные клетки с признаками атипии и разрушением. Neo?
Микрофото (а, б, в). Мазок слизистой полости рта пациентки М. 1963 г.р., несколько полей зрения одного из цитологических препаратов.
Микрофото: a, б, в.
Пример 5. Из истории амбулаторной карты пациента Ш. Дима 5 лет.
Из выписного эпикриза: Острый панэнцефалит, герпетической этиологии, тяжёлое течение. Эпилепсия симптоматическая. Дисбактериоз кишечника. Иммунодефицитное состояние. Носитель HSV 2 типа. Выделен после рождения на 15-18 день.
Заключение: Косвенные признаки наличия вирусного поражения, Лейкоплакия. Носитель HSV 2 типа.
Микрофото (а, б, в) нескольких полей зрения одного из цитологических препаратов, мазок со слизистой прямой кишки.
Микрофото: a, б, в.
В результате проведения диссертационного исследования, научных и экспериментальных работ получила подтверждение основная концепция «феномена гирудобиопсии» — полученный биологический материал пригоден для лабораторного исследования методом цитологического анализа.
Причины отторжения патологически изменённых клеток, в процессе гирудотерапии, связаны с необратимыми морфологическими изменениями в клетках.
В научной литературе впервые появляется упоминание об изучении механизма отторжения патологически изменённых клеток в 2014 году [19], вопрос ранее не изучался.
Впервые, начиная с 2012 года и по настоящее время, проводятся лабораторные исследования патологически изменённых клеток после сеанса гирудотерапии.
Приготовленные цитологические препараты исследовали с помощью оптического светового микроскопа с диагностическими целями – цитологическое заключение, полученное в результате проведённого исследования биологического материала, служит морфологическим подтверждением о наличии и/или отсутствии патологических процессов в организме человека. [20]
Механизм отторжения изменённых патологических клеток имеет сложный каскадный, многокомпонентный и мультиполярный характер, связанный с аквасистемами человека и медицинской пиявки. [21,22]
Изучение механизма взаимодействия человека и пиявки связано с морфологией клеток и межклеточного пространства [23,24,25], биохимическими [26,27,28] и биофизическими [29,30,31,32,33,34] и энергетическими [35,36,37,38] процессами, происходящими в организме человека. Данная тема требует дальнейшего изучения.
Внедрение основных результатов диссертационного исследования в практику врачей показало возможности диагностики патологии; использование разработанной методики получения биологического материала и приготовления цитологических препаратов для лабораторного анализа; обучение курсантов Академии Гирудотерапии и внедрение новшества «феномена гирудобиопсии» в повседневную практическую работу специалистов, прошедших обучение на кафедре.
Особенностью способа получения биологического материала для исследования является получение клеток без хирургического вмешательства, без применения специального оборудования для прицельной биопсии и различных приспособлений типа скальпеля, цитощётки, пинцета и других инструментов.
Анализ публикаций в периодической печати и наличие собственного опыта практической работы в онкологии более 10 лет позволяет говорить о том, что широкое использование цитологического метода даёт возможность диагностировать фоновые заболевания, определять наличие косвенных признаков вирусной инфекции, предраковые — диспластические изменения, ранние стадии рака шейки матки и влагалища и других локализаций. [39,40]
Важными условиями наличия морфологического диагноза являются адекватное получение биологического материала, приготовление цитологических препаратов и оценка морфологических изменений в изучаемых клетках специалистами клинической лабораторной диагностики – врачами-лаборантами.
Заключение. Впервые изучение «феномена гирудобиопсии» и применение цитологического метода лабораторного исследования предложено с целью диагностики патологии и как способ изучения механизма гирудотерапии.
Методика обучения курсантов Академии Гирудотерапии на курсах повышения квалификации включает в себя лекционный и практический материал, наработанный с 1992 года и по настоящее время, и дополнительно с 2012 года добавлены материалы по лабораторным методам диагностики патологии.
Результаты диссертационной работы послужили основанием для разработки и внедрения «феномена гирудобиопсии» в повседневную практику гирудотерапевтов для получения морфологического подтверждения наличия заболевания у пациентов.
Цитологический метод, основанный на изучении морфологии клеток, особенностей межклеточных связей и общей микроскопической картины, способен дать сведения о патологическом процессе на уровне гистологической характеристики.
При проведении микроскопического исследования в световом оптическом микроскопе обнаруживают патологически изменённые клетки, морфологические характеристики изменений в клетках при различных заболеваниях.
Сущность данного направления в лабораторной диагностике заключается в том, что оно базируется на глубоком знании патологии, патологической анатомии и клиники, понимании сущности процессов происходящих в клетках.
Показано, что цитологический метод как один из объективных методов, позволяющих получить ценные данные для диагностики патологии, предопухолевых и опухолевых заболеваний при применении авторской методики профессора Крашенюка А.И. — Системного метода лечения медицинскими пиявками. [41, 42]
Полученные данные, в результате лабораторного анализа, служат морфологическим подтверждением наличия патологии и обеспечивают выбор тактики лечения пациентов.
Впервые предложена возможность использования цитологического метода исследования клеточного отделяемого со слизистых оболочек прямой кишки, влагалища и полости рта:
особенностью способа получения биологического материала для исследования является получение клеток без хирургического вмешательства, без применения специального оборудования для прицельной биопсии и различных приспособлений типа скальпеля, цитощётки, пинцета и других инструментов.
Предположительно в основе явления «феномена гирудобиопсии» лежат биохимические и биофизические процессы, происходящие в клетках под воздействием состава секрета слюны пиявки на мембранную систему клеток и межклеточного матрикса, с учётом физических параметров и изменениями в организме человека в процессе сеансов гирудотерапии.
Причины отторжения патологически изменённых клеток и механизм взаимодействия живых систем человека и пиявки находится в стадии изучения и требует дополнительного исследования.
Библиография.
1. Крашенюк А.И, Маркова Е.П. // Использование морфологического исследования (цитологического метода) при гинекологических заболеваниях в процессе гирудотерапии. I Всемирный конгресс Гирудотерапии: Тезисы докладов. Москва, 24-25 сентября 2013 г. под Ред. К.В.Сухова.- М.:Norwell Partners Inc., 2013. – 138с, 64-67с
2. Использование цитологического метода при анализе вагинального отделяемого при интравагинальных постановках медицинских пиявок. // Крашенюк А.И¹., Маркова Е. П..¹׳², Москва, Асклепейон, ежеквартальный научно-практический журнал по медицине, 1-4, 2014, стр. 54-56.
3. Патологоанатомическая диагностика опухолей человека: Руководство в 2 томах. /Под ред. Н.А.Краевского, А.В. Смольянникова, Д.С.Саркисова. – 4-е изд., перераб. И доп. – М.: Медицина, 1993 с.: ил.
4. Петрова А.С. , Полонская Н.Ю. // Методы клинической цитологии. Методическое пособие. Брянск. 1993 г.
5. Шабалова И.П. // Цитологическая диагностика заболеваний шейки и тела матки. Методическое пособие, Москва, 1995 г.
6. Альтгаузен А.Я. // Морфологическое исследование пунктатов опухолей. Изд-во Медицинской литературы. М., 1962г, 132
7. Шиллер-Волкова Н.Н., Никитина Н.И., Агамова К.А., Брин М.Л. // Цитологичекая диагностика злокачественных новообразований. Атлас. М., Медицина,: 1964, 264с., ил.
8. Ранняя онкологическая патология. // Под. Ред. Б.Е. Петерсона, В.И.Чиссова. – Москва, Медицина, 1985, — 320 стр.
9. Организация работы централизованной цитологической лаборатории. // Методические рекомендации. Под ред. Е.В. Капацинский, Москва, 1982 г.
10. Жандарова Л.Ф. , Дмитриев Ю.Я. //Цитологическая диагностика опухолевых заболеваний. Учебно – методическое пособие. Издательство Саратовского университета, 1987 г.
11. Шабалова И.П., Касоян К.Т. // Цитологическая диагностика заболеваний шейки и тела матки. 3-е издание, исправленное и дополненное. М. – Тверь: ООО «Издательство «Триада».2010, 232 с.:382 ил.ISBN 978-5-94789-402-8
12. Хмельницкий О.К. // Цитологическая и гистологическая диагностика заболеваний шейки и тела матки.- СПб.: СОТИС, 2004.- 334 с.
13. Цитологическая диагностика опухолей и предопухолевых процессов.// Под ред. проф. А.С. Петровой — М.: Медицина, 1985, 304 с.
14. Wied G.L., Keebler C.M., Rosenthal D.L. et al. «Compendium on quality assurance. Proficiency testing and workload limitation in clinical cytology» -Tutorials of cytology, Chicago, Illinois. USA, 1995, 399 p.
15. Вишневская Е.Е.// Справочник по онкогинекологии. – 2-е изд., переаб. И доп., — Мн.: Беларусь, 1994.- 432 с., 32 ил.
16. Микроскопическая техника. Руководство для врачей-лаборантов. //Под ред. Д.С. Саркисова, Ю.Л. Перова. — М.; Медицина, 1996; 542 с.
17. Обеспечение качества подготовки образцов биологических материалов для цитологических исследований. Методические указания 2003/34. МОСКВА -2003. Авторы: Н.А. Шапиро, В. Н. Богатырев,А.С. Петрова; Н.Ю.Полонская, В.К. Соколова, О. В. Чистякова, И.В. Юрасова, В.В. Меньшиков, О.Г. Кадашева.
18. Ронин В.С., Старобинец Г.М // Руководство к практическим занятиям по методам клинических лабораторных исследований. Москва, «Медицина», 1989
19. Изучение механизма взаимодействия человека и медицинской пиявки. // Крашенюк А.И¹., Маркова Е. П..¹׳², Труды Конгресса-2014. Фундаментальные проблемы естествознания и техники. Том 36-2. Санкт-Петербург. 2014, стр.191-197.
20. А.И.Крашенюк, Е.П.Маркова // Прикладное применение цитологического метода исследования в гирудотерапии при диагностике заболеваний: сборник избранных статей, примеры из практики, справочные материалы и методические рекомендации.// Санкт-Петербург: СИНЭЛ, 2021.- 112 с.
21. Крашенюк А.И., Дульнев Г.Н., Никандрова С.М. ,Ветрова, И.А., Щеголева М.А., Андрющенко А.А., Ефимов П.А., Бойцова А.А., Данилов А.Д. // Аквакоммуникационный эффект ультрафиолетового облучения и феномен дистанционной передачи этого эффекта от человека к человеку. № Журнал «Нелекарственная медицина», 4/2010, стр.35-44.
22. Крашенюк А.И., Коротков К.Г., Курылёва Н.А., Маркова Е.П., Крашенюк С.В., Бойцова А.А. // Новая интерпретация анализа ГРВ – свечения пальцев человека в процессе гирудотерапии. ГК «KTI» «Биотехпрогресс». XVIII Международный Научный Конгресс. Биоэлектрография. Тезисы. СПб 2014. стр32-33
23. Артюхов В.Г. Наквасина М.А // Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами.Издательство ВГУ, 2000.–296с.
24. Алексеев А.А., Ларионова И.С., Дудкина И.А.// Мезодермальная и альтернативная медицина. – М.; Эдиториал, УРСС, 2001, — 408 с.
25. Серов В.В., Шехтер А.Б. // Соединительная ткань (функциональная морфология и общая патология). – М.: Медицина, 1981, 312 с.
26. Баскова И.П., Исханян Г.С. // Гирудотерапия. Наука и практика. Москва, 2004 г, стр. 508
27. Никонов Г.Н // Медицинская пиявка и основы гирудотерапии. – СПб: «СДС», 1998.- 320с.
28. Roy T. Sawyer // Leech biology and Behaviour Includes bibliographies and indexes. Clarendon Press. Oxford, 1986, in 3 vol.
29. Крашенюк А.И¹., Маркова Е. П..¹׳² // Изучение биофизического аспекта механизма взаимодействия человека и медицинской пиявки. // Труды Конгресса-2016, Фундаментальные проблемы естествознания и техники. Том 37-2. Санкт-Петербург. 2016, стр.58-63.
